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| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HZ-75244 |
| 用途 | |
| 包裝規(guī)格 | 20T |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。
產(chǎn)品詳細(xì)信息
名稱：雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
規(guī)格： 20T/50T
品牌：上海滬崢
用途】 用于雞傳染性支氣管炎病毒病的檢測、診斷和行病學(xué)調(diào)查。
【操作步驟】1.RNA提取
(1) 取疑似雞傳染性支氣管炎病的病料（*、肺或尿液）1~4g于無菌研缽，研磨并用Hanks液或PBS稀釋成1：4劑，分裝1.5 mL滅菌EP管，反復(fù)凍融2~3次，8000r/min,心5分鐘。
（2）取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。
（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。
（4）將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管（試劑盒內(nèi)提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。
（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。
（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。
（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。
（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。
（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內(nèi)提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>
3 .PCR操作
4.電泳
配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL混合1uL TU-8，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3uLTU-7，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。
M 1
【結(jié)果判定】
在約440bp位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性
雞傳染性支氣管炎一步法RT-PCR診斷試劑盒
【注意事項(xiàng)】
1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。
3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。
4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準(zhǔn)確造成無結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。
6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。
傳統(tǒng)PCR對基因的檢測只能定性，不能定量主要是由擴(kuò)增產(chǎn)物積累的動力學(xué)所決定的：①PCR產(chǎn)物在擴(kuò)增過程中呈指數(shù)積累，當(dāng)產(chǎn)物增加到一定程度，產(chǎn)物就停止了指數(shù)積累。不同起始模板，其指數(shù)增長期所用的循環(huán)是不同的，因此，不同數(shù)量基因的樣品在同一循環(huán)次數(shù)中積累的產(chǎn)物不能作為樣品基因定量的依據(jù)；②PCR產(chǎn)物積累到一定程度就不能再增加，再進(jìn)入平臺期。為了擴(kuò)大PCR檢出的靈敏度通常要增加循環(huán)次數(shù)，循環(huán)次數(shù)增加使得樣品目的基因含量高的反應(yīng)管已進(jìn)入平臺期，終產(chǎn)物量并不代表樣品目的基因含量；③PCR反應(yīng)的管間擴(kuò)增效率差異總是存在的，既然PCR產(chǎn)物呈指數(shù)增長，由擴(kuò)增效率差異引起的產(chǎn)物擴(kuò)增差異也呈指數(shù)積累，增加循環(huán)次數(shù)勢必增加終產(chǎn)物的差異，而減少循環(huán)次數(shù)又降低了檢測的靈敏度。FQ-PCR采用實(shí)時檢測，使所有含有不同數(shù)量的目的基因均在同一條件（達(dá)到熒光閾值）下進(jìn)行分析，因而更具有可比性。而且，這一條件處于擴(kuò)增產(chǎn)物指數(shù)積累初期，合成產(chǎn)物所需的dNTP、酶、離子均處于飽和的*狀態(tài)，所以FQ-PCR循環(huán)參數(shù)與起始模板間有良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)＞0.95），實(shí)現(xiàn)了極為精確的基因定量檢測。
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