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| 產(chǎn)地 | 國(guó)內(nèi) |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號(hào) | HZS0260 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 |
產(chǎn)品名稱：
禽流感病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
2．復(fù)性（退火）和延伸溫度
將PCR反應(yīng)所需的成分配置完后，在PCR儀上于94-96℃預(yù)加熱幾十秒至幾分鐘，使模板DNA充分變性，然后進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)。在每一個(gè)循環(huán)中，先于94℃保持30秒鐘使模板變性，然后將溫度降到復(fù)性溫度（一般50-60℃之間），一般保持30秒鐘，使引物與模板充分退火；在72℃保持1分鐘（擴(kuò)增1kb片段），使引物在模板上延伸，合成DNA，完成一個(gè)循環(huán)。重復(fù)這樣的循環(huán)25～35次，使擴(kuò)增的DNA片段大量累積。*后，在72℃保持3-7min，使產(chǎn)物延伸完整，4℃保存。
1．常規(guī)程序
復(fù)性的溫度是PCR擴(kuò)增是否順利的關(guān)鍵因素，通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數(shù)設(shè)定為72℃。如果復(fù)性的溫度很高，可以將延伸溫度和復(fù)性溫度設(shè)置成同一溫度，變成二步法PCR。
3．反應(yīng)時(shí)間
變性步驟一般使用30秒鐘，如果模板的G+C含量較高，或直接用細(xì)胞做模板，變性時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。復(fù)性時(shí)間有30秒種一般是足夠的。延伸時(shí)間由擴(kuò)增產(chǎn)物的大小決定，一般采用1kb用1分鐘來(lái)保證充足的時(shí)間。
4．循環(huán)次數(shù)
循環(huán)次數(shù)主要與模板的起始數(shù)量有關(guān)，在模板拷貝數(shù)為104～105數(shù)量級(jí)時(shí)，循環(huán)數(shù)通常為25～35次。
平臺(tái)效應(yīng)（plateaueffect）：PCR擴(kuò)增過(guò)程后期會(huì)出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長(zhǎng)的現(xiàn)象。原因：底物和引物的濃度已經(jīng)降低，dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低，產(chǎn)生的焦磷酸會(huì)出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用，非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競(jìng)爭(zhēng)作用，擴(kuò)增產(chǎn)物自身復(fù)性，高濃度擴(kuò)增產(chǎn)物變性不徹底。
5．PCR反應(yīng)液的配制
PCR反應(yīng)體系的配置方式有時(shí)也會(huì)影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣，在*后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒(méi)有帶加熱的蓋子，要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油，防止水分蒸發(fā)。
對(duì)于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時(shí)，有時(shí)會(huì)擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個(gè)問(wèn)題時(shí)，如果將反應(yīng)成分分開(kāi)配制，A管含模板、引物和dNTP，以及調(diào)整體積的H2O，B管含緩沖液、DNA聚合酶和水，然后再將兩管溶液混合起來(lái)，可較好地克服這個(gè)問(wèn)題。
按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問(wèn)題。熱啟動(dòng)（hotstart）PCR操作方式可較好解決這一問(wèn)題。將dNTP、緩沖液，Mg2+和primer先配制好，然后加入一粒蠟珠（如AmpliWaxPCRQam100），加熱熔化，再冷卻，使蠟將溶液封住，*后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后，蠟層熔化，所有反應(yīng)成分才會(huì)混合在一起。
禽流感病毒（通用型）檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
核酸檢測(cè)試劑盒通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)可以對(duì)來(lái)源廣泛的樣本的多種疫病病毒核酸進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)。由于是針對(duì)各種病毒的遺傳物質(zhì)采用特異性極高的PCR方法進(jìn)行檢測(cè)，因此，我們的試劑盒能夠提供其他檢測(cè)方法無(wú)法比擬的快速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。
◇ 快速：
★ 傳統(tǒng)的病毒方法檢測(cè)需要6天時(shí)間；
★ 免疫學(xué)方法檢測(cè)需要2天時(shí)間；
☆滬崢的熒光探針核酸檢測(cè)試劑盒整個(gè)操作僅需2小時(shí)
◇ 簡(jiǎn)單：
☆ 一步法檢測(cè)技術(shù)，易于操作，更降低污染
☆ 軟件指導(dǎo)的檢測(cè)過(guò)程
☆ 無(wú)需電泳或是其他PCR后處理
◇ 準(zhǔn)確：
☆ 專業(yè)的引物探針設(shè)計(jì)，高特異性檢測(cè)目的基因
☆ 優(yōu)秀的反應(yīng)體系，降低假陽(yáng)性和假陰性
☆ 極好的穩(wěn)定性、重復(fù)性
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