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上海滬崢生物科技有限公司
產(chǎn)品展廳
東部馬腦炎病毒(EEE)檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)
  • 品牌:上海滬崢
  • 產(chǎn)地:國內(nèi)
  • 貨號:HZW0730
  • 價格: ¥1380/千克
  • 發(fā)布日期: 2020-03-03
  • 更新日期: 2025-07-11
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 國內(nèi)
品牌 上海滬崢
貨號 HZW0730
用途 僅限科研
包裝規(guī)格 48T/盒
純度 詳詢客服%
CAS編號
是否進口

東部馬腦炎病毒(EEE)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法) 

本試劑盒用一對東部馬腦炎病毒(EEE)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法) 


特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光
PCR技術(shù)對
部馬腦炎病毒(WEE)進行體外擴增檢測,用于對可疑感染者的病原學診斷。 

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標本:取適量標本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取

1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)代檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1

管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:

試劑

WSSV 反應液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

20μl

1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl,加入相應的

反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內(nèi);

5. 結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調(diào)整。
設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規(guī)則的噪音線)的zui高點。
結(jié)果判斷
陽性:檢測樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期;
可疑:檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復一次實驗,如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。

 注意事項
1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
   1)第一區(qū):樣本制備區(qū)。
 2)第二區(qū):模板添加區(qū)。
   3)第三區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
    分區(qū)之間*進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2.實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。
3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5.反應結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。




 





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