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產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號 | HZW0730 |
用途 | 僅限科研 |
包裝規(guī)格 | 48T/盒 |
純度 | 詳詢客服% |
CAS編號 | |
是否進口 |
東部馬腦炎病毒(EEE)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)
本試劑盒用一對東部馬腦炎病毒(EEE)核酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)
特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對東部馬腦炎病毒(WEE)進行體外擴增檢測,用于對可疑感染者的病原學診斷。
【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,有效期12個月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】
上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標本:取適量標本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取
1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準備區(qū))
根據(jù)代檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1
管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:
試劑
WSSV 反應液
酶液
用量(樣本數(shù)為N)
20μl
1μl
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl,加入相應的
反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴增(核酸擴增區(qū))
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內(nèi);
5. 結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線(baseline):一般情況下,對ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對PE5700設(shè)為3-15cycle,對MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對基線適當調(diào)整。
設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對照擴增曲線(無規(guī)則的噪音線)的zui高點。
結(jié)果判斷
陽性:檢測樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期;
可疑:檢測樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復一次實驗,如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測不到樣本Ct值或Ct值為40。
◆ 注意事項
1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
1)第一區(qū):樣本制備區(qū)。
2)第二區(qū):模板添加區(qū)。
3)第三區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2.實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。
3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5.反應結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。