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貓衣原體(CP)核酸檢測試劑盒(PCR法)

操作步驟
1  病毒 RNA 的提取
1.1  取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～

5 min。

1.2  將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質(zhì)，以免離心時 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。

1.3  棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。

1.4 重復(fù)步驟 1.3。

1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。

1.6  將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm

離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。



貓衣原體(CP)核酸檢測試劑盒(PCR法)2  結(jié)果描述及判定

陽性對照 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線，陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線，實驗結(jié)果成 立；被檢樣品 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線為 AIV 陽性；被檢樣品 30＜Ct＜37 并出現(xiàn)特定的擴 增曲線，需重新取樣提取 RNA，擴增后進行結(jié)果判定，如仍是可疑，可判定為陽性；被檢樣品 Ct 值≥37 時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性；對于某些未呈現(xiàn) S 型曲線，但本底較高的樣 品，應(yīng)為陰性。

◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
   1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。
 2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。
   3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
   ★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
5．反應(yīng)結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

實驗操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進行）
剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進行PCR擴增反應(yīng)。
3. 擴增反應(yīng)（擴增及產(chǎn)物分析區(qū)）
使用熒光定量PCR儀，熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇TAMRA。