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牛肺疫支原體(MB)核酸檢測試劑盒(PCR法) 

操作步驟
1  病毒 RNA 的提取
1.1  取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～

5 min。

1.2  將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質，以免離心時 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。

1.3  棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。

1.4 重復步驟 1.3。

1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。

1.6  將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm

離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。



結果判定
1 結果分析條件設定 閾值設定原則：閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據(jù)儀器噪音

情況進行調整。
牛肺疫支原體(MB)核酸檢測試劑盒(PCR法) 2  結果描述及判定

陽性對照 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線，陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線，實驗結果成 立；被檢樣品 Ct 值≤30 并出現(xiàn)特定的擴增曲線為 AIV 陽性；被檢樣品 30＜Ct＜37 并出現(xiàn)特定的擴 增曲線，需重新取樣提取 RNA，擴增后進行結果判定，如仍是可疑，可判定為陽性；被檢樣品 Ct 值≥37 時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判定為陰性；對于某些未呈現(xiàn) S 型曲線，但本底較高的樣 品，應為陰性。

◆ 注意事項
1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。
   1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。
 2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。
   3）第三區(qū)：擴增及產物分析區(qū)。
   ★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。
3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應避免反復凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。
6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內使用。