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產(chǎn)地 | 國內(nèi) |
品牌 | 上海滬崢 |
貨號 | HZW0722 |
用途 | 僅限科研 |
包裝規(guī)格 | 48T/盒 |
純度 | 詳詢客服% |
CAS編號 | |
是否進口 |
牛副結(jié)核分歧桿菌(MPB)核酸檢測試劑盒(PCR法)
操作步驟
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照,分別加入裂解液 600 μL,充分顛倒混勻,室溫靜置 3~
5 min。
1.2 將液體吸入吸附柱中(吸附柱要套上收集管,吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質(zhì),以免離心時 堵塞吸附柱),13000 rpm 離心 30 s。
1.3 棄去收集管中液體,加入 600 μL 洗液,13000 rpm 離心 30 s。
1.4 重復(fù)步驟 1.3。
1.5 棄去收集管中液體,13000 rpm 空柱離心 2 min,以除去殘留的洗滌液。
1.6 將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中,向柱中央加入洗脫液 50 μL,室溫靜置 1 min,13000 rpm
離心 30 s,離心管中液體即為模板 RNA。
結(jié)果判定
1 結(jié)果分析條件設(shè)定 閾值設(shè)定原則:閾值線設(shè)定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據(jù)儀器噪音
情況進行調(diào)整。
牛副結(jié)核分歧桿菌(MPB)核酸檢測試劑盒(PCR法) 2 結(jié)果描述及判定
【參考值(參考范圍)】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定:
(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
◆ 注意事項
1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
1)第一區(qū):樣本制備區(qū)。
2)第二區(qū):模板添加區(qū)。
3)第三區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2.實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。
3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4.反應(yīng)液中的成分對光敏感,應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當體積分管保存。
5.反應(yīng)結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。
實驗操作
1.模板制備(樣本制備區(qū))
建議使用配套水生動物病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。
2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒上進行)
剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開封口膜,向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板,順序為NG、待測樣品模板、PG-VH-P。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30s,離心1min,立即進行PCR擴增反應(yīng)。
3. 擴增反應(yīng)(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))
使用熒光定量PCR儀,熒光基團選擇FAM,淬滅基團選擇TAMRA。