馬腦脊髓炎病毒（VEEV）試劑盒（熒光-PCR法）

規(guī)格：50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對馬腦脊髓炎病毒（VEEV）基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰代。

馬腦脊髓炎病毒（VEEV）試劑盒（熒光-PCR法）它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)馬動脈炎病毒高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研

7.．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

反應五要素：

 參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù) 個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。